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ELISA實驗中常見的誤差來源有哪些?
ELISA實驗中常見的誤差來源可分為以下幾類，結合最新研究與實踐總結如下：
一、樣本相關因素
內(nèi)源性干擾物質(zhì)?：類風濕因子(RF)、補體、嗜異性抗體等可與抗體非特異性結合，導致假陽性?。
外源性干擾?：溶血樣本中的血紅蛋白具有過氧化物酶活性，可能引發(fā)非特異性顯色;細菌污染或樣本反復凍融也會影響結果準確性?。
抗凝劑影響?：EDTA、肝素等可能干擾酶反應或抗原抗體結合?。
二、操作與試劑因素
加樣誤差?：移液器未校準、吸頭松動或加樣速度不均導致孔間差異?。
孵育條件?：溫度不均(如邊緣效應)、時間控制不當影響反應一致性?。
洗滌問題?：沖洗不凈(殘留未結合物質(zhì))或過度沖洗(洗脫結合復合物)?。
試劑質(zhì)量?：抗體純度低、顯色液變質(zhì)或稀釋不均直接影響信號穩(wěn)定性?。
三、設備與環(huán)境因素
酶標板問題?：孔底劃痕或邊緣效應導致吸光度偏差?。
儀器校準?：酶標儀濾光片設置錯誤或波長選擇不當影響讀數(shù)?。
交叉污染?：重復使用封板膜或吸頭導致孔間污染?。
四、系統(tǒng)誤差與人為因素
方法局限性?：鉤狀效應(高濃度抗原假陰性)或抗體交叉反應?。
操作差異?：不同工作人員的手法(拍干力度、孵育時間控制)引入批間變異?。
優(yōu)化建議
標準化操作?：使用多通道移液器、嚴格控溫(37℃±1℃)、增加洗滌次數(shù)?。
質(zhì)量控制?：設立空白對照、定期校準儀器、避免溶血樣本?。
通過針對性控制上述因素，可顯著提升ELISA結果的重復性和準確性?。
注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒
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